PCR技術(shù)的定量原理：
擴(kuò)增曲線
在Real- qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
熒光染料的優(yōu)點(diǎn)：
產(chǎn)品僅用于科研使用簡(jiǎn)便；
可以與任何PCR產(chǎn)物結(jié)合；
價(jià)格便宜；
熒光染料的缺點(diǎn)：
不能區(qū)分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會(huì)影響檢測(cè)的敏感性
非特異性產(chǎn)物會(huì)影響結(jié)果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴(kuò)增問題可以通過(guò)熔解曲線 (Melting curve) 進(jìn)行識(shí)別，進(jìn)而通過(guò)PCR引物的設(shè)計(jì)和反應(yīng)條件的優(yōu)化得以解決。總的來(lái)說(shuō)，SYBR Green I方法是一種基礎(chǔ)也的Real-time qPCR實(shí)驗(yàn)手段。

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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據(jù)目的基因設(shè)計(jì)合成一個(gè)能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標(biāo)記熒光基團(tuán)，3'端標(biāo)記淬滅基團(tuán)。
正常情況下兩個(gè)基團(tuán)的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發(fā)出熒光。PCR擴(kuò)增時(shí)，引物與該探針同時(shí)結(jié)合到模板上，探針的結(jié)合位置位于上下游引物之間。
當(dāng)擴(kuò)增延伸到探針結(jié)合的位置時(shí)，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，從而使其發(fā)出熒光。檢測(cè)到的熒光分子數(shù)與PCR產(chǎn)物的數(shù)量成正比，因此，根據(jù)PCR反應(yīng)體系中的熒光強(qiáng)度即可計(jì)算出初始DNA模板的數(shù)量。
TaqMan探針技術(shù)解決了熒光染料與非特異性擴(kuò)增結(jié)合的問題，反應(yīng)結(jié)束后無(wú)需通過(guò)熔解曲線檢測(cè)，縮短了實(shí)驗(yàn)時(shí)間。
TaqMan探針技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩(wěn)定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術(shù)的缺點(diǎn)：
成本高；
設(shè)計(jì)難度大；
只能用于檢測(cè)產(chǎn)物長(zhǎng)度低于150bp的反應(yīng)。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態(tài)性以及根據(jù)SNP區(qū)別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產(chǎn)品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來(lái)也叫Real-Time PCR，是美國(guó)PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來(lái)的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來(lái)實(shí)現(xiàn)其定量功能的。其原理：隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過(guò)一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過(guò)熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。
一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段，熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化。而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR 的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，根據(jù)終的 PCR 產(chǎn)物量也不能計(jì)算出起始 DNA 拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段， PCR產(chǎn)物量的對(duì)數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，我們可以選擇在這個(gè)階段進(jìn)行定量分析。為了定量和比較的方便，在實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 技術(shù)中引入了兩個(gè)非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途！
溴酸鈉(> 98%,BC)CD9 (D8O1A) Rabbit mAb氟-5-甲

次氯酸鈉溶液Phospho-PRAS40 (Thr246) (D4D2) XP® Rabbit mAb1-BOC-5-溴吲哚-2-酸

酸氫二鈉十二水(>98%,BR)Phospho-PRAS40 (Thr246) (D4D2) XP® Rabbit mAb硝酸咪康唑

鎢酸鈉(>98%,BC)Calbindin (D1I4Q) XP® Rabbit mAb2-溴咪唑并[1,2-a]吡

硬脂酸鈉(>95%,BR)Calbindin (D1I4Q) XP® Rabbit mAb(R)-(-)-2-芐-1-乙

硫代硫酸鈉無(wú)水(>98.5%,BC)UCHL1 (D3T2E) XP® Rabbit mAb3,4,5-三氯酸

Sulfo NHS LC BiotinUCHL1 (D3T2E) XP® Rabbit mAb2,6-二氟-

Sulfo NHS SS Biotin4F2hc/CD98 (D6O3P) Rabbit mAb鄰甲基肉桂

四乙酰核糖(>98% (HPLC),BC)AMPA Receptor 1 (GluA1) (D4N9V) Rabbit mAb2-甲基丁酸-甲基丁酯

酪氨酸脫羧酶IL-17F (D3M4D) Rabbit mAb (Mouse Specific)5-甲酰基尿嘧啶

維多利亞藍(lán) RBAP1 (D1W9B) Rabbit mAb2-[(2,二)甲基]-1H-并咪唑

α-酮戊二酸單鹽(>98%，BR)Methyl-NF-κB p65 (Lys310) Antibody茄尼

1-萘乙(>98%,BR)Golgin-97 (D8P2K) Rabbit mAb2-氟基乙

1-環(huán)己基二乙酸單酰(>98%，BR)DC-SIGN (D7F5C) XP® Rabbit mAb氨基-

三氮唑(>98%，BR)SOD2 (D9V9C) Rabbit mAb

1,2-乙二硫(>98.5%，BR)Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)氟-酚

1,3,5-三溴(>98%,BR)Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb2-氯-嘧啶甲酸

1,二羥基萘(>98%,BR)Syk (D3Z1E) XP® Rabbit mAb基-氯
伽氏疏螺旋體探針法熒光PCR檢測(cè)試劑盒黑色素瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)ELISA試劑盒GABRA1  G1氨基丁酸A型受體α1抗體100 ul

黑色素瘤ELISA試劑盒GABABR1  gamma氨基丁酸B型受體1抗體100 ul

黑色素ELISA試劑盒GABABR2/GB2  G氨基丁酸B型受體2抗體100 ul

核因子κB抑制物激酶β(IKK-β)ELISA試劑盒GAD65  谷氨酸脫羧酶-65抗體100 ul

核因子κB抑制物激酶α(IKK-α)ELISA試劑盒GAD67  谷氨酸脫羧酶-67抗體100 ul

核因子κB(NF-κB)ELISA試劑盒GAD65  谷氨酸脫羧酶-65抗體(C端）1750 ul

核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 ELISA試劑盒GADD34  生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因34抗體50 ul

核心蛋白聚糖(DCN)ELISA試劑盒GADD45  生長(zhǎng)抑制DNA損傷基因45抗體350 ul

核糖體合成蛋白NSA2同源物(NSA2)ELISA試劑盒GADD153  GADD153抗體100 ul