熒光定量PCR試劑盒技術：
產品僅用于科研本實用新型技術公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設有限位凸起，下盒體的頂面上設有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側壁的下端均軟連接有側蓋，側蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設有環形凸起，兩個卡勾分別勾住環形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內部設有固定桿，固定桿上通過轉動件轉動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側均設置有收納槽。本實用新型技術通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續數據分析，提供實驗報告給您。 產品名稱 | 蒙得維的沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Salmonella montevideo | 貨號 | YSP97163 |
樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μ
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環境中進行。好設立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結果，純化的方法越簡單越好。
３．產品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
核糖核酸酶A6(RNASE6)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 芽枝狀枝孢 100g 核糖核酸酶A7(RNASE7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 98% 葡糖酸醋桿菌屬 25g 轉運蛋白2(TNPO2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 雜色曲霉 25g 橋粒芯糖蛋白4(DSG4)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 球孢白僵菌 5g 胸腺旁腺素(PTMS)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 栗疫菌 25g 單酰甘油脂肪酶(MGL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 樊慶生氏紅球菌 1g 角蛋白6A(KRT6A)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 泛菌屬 5g 失調蛋白10(ATXN10)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥97% 釀酒酵母 1g 失調蛋白7(ATXN7)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) ≥97% 發酵畢赤酵母 250mg 失調蛋白3(ATXN3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 海生紅球菌 100g 線粒體鐵蛋白(FTMT)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% pGEX-5X-3 25g 饑餓素/肥胖抑制素前激素原(GHRL)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 貝倫格葡萄座腔菌梨生專化型 500g 胃動素受體(MLNR)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% Enterobacter ludwigii Hoffmann 1g 細胞周期素A(CCNA)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 99% 黃曲霉 5g 細胞周期素A1(CCNA1)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 96% 婁徹鏈霉菌 1g 細胞周期素B(CCNB)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 95% 海洋桿菌 1g 細胞周期素B2(CCNB2)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 95% 糖多孢菌 250mg 細胞周期素B3(CCNB3)檢測試劑盒(酶聯免疫吸附試驗法) 97% 地衣芽孢桿菌 5g
蒙得維的沙門氏菌探針法熒光PCR檢測試劑盒溶血脂酸受體蛋白1抗體P53(wt-p53) 腫瘤抑制基因抗原（野生型P53）100 ul 溶血脂酸受體蛋白2抗體Mtp53(Mutant type p53) 突變型P53抗原100 ul 溶血脂酸受體蛋白3抗體WIG-1(wtp53-induced gene 1) 野生型p53誘導基因1抗原1 Kit 內皮細胞的分化蛋白6抗體P73 proin P73腫瘤抑制基因抗原1 Kit 外生性骨疣樣蛋白2抗體p70 S6 Kinase/P70 Beta1 p70S6Kb抗原100 ul 酸化eIF4E結合蛋白抗體PALB2(partner and locaizer of BRCA2) 癌易感基因相關蛋白2100 ul 酸化eIF4E結合蛋白抗體PAFR/PTAFR 血小板活化因子受體抗原100 ul 內皮細胞特異性分子1抗體Phospho-PAK4 (Ser99) peptide 酸化p21激活激酶4多肽抗原100 ul 真核翻譯起始因子3F抗體PAK7/PAK5/MBT 激活激酶PAK7/PAK5抗原100 ul |
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