熒光定量PCR試劑盒技術(shù)：
產(chǎn)品僅用于科研本實用新型技術(shù)公開了一種實時熒光定量PCR試劑盒，包括盒體，盒體由上盒體和下盒體組成，上盒體的底面上設(shè)有限位凸起，下盒體的頂面上設(shè)有與限位凸起匹配的凹槽，且在下盒體左右側(cè)壁的下端均軟連接有側(cè)蓋，側(cè)蓋遠離下盒體的一端連接有卡勾，下盒體的上端邊緣處設(shè)有環(huán)形凸起，兩個卡勾分別勾住環(huán)形凸起的左右兩端將上盒體固定在下盒體上；凹槽的內(nèi)部設(shè)有固定桿，固定桿上通過轉(zhuǎn)動件轉(zhuǎn)動連接有用于放置試管的試管架；下盒體的左右兩側(cè)均設(shè)置有收納槽。本實用新型技術(shù)通過將盒體分為上下組合的兩個部分，并將兩個部分通過側(cè)蓋連接，即可保證試劑盒的便攜性，同時使用試劑盒自帶的試管可提高檢測的效率。
客戶只需提供樣品和待檢測基因名稱即可。由我們提取RNA，設(shè)計并合成引物，完成熒光定量PCR實驗以及后續(xù)數(shù)據(jù)分析，提供實驗報告給您。

樣品RNA的抽提：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA質(zhì)量檢測
1）紫外吸收法測定
先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋（1:100）后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液 濃度和純度。
① 濃度測定
A260下讀值為1表示40 g RNA/ml。樣品RNA濃度(g/ml)計算公式為：A260 ×稀釋倍數(shù)× 40 g/ml。
實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項
１．PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行。好設(shè)立一個的PCR實驗室。
２．純化模板所選用的方法對污染的風險有影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡單越好。
３．產(chǎn)品僅用于科研所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套。
甲硝唑雜質(zhì)A（2-甲基-5-硝基咪唑）標準品氨基酚

硫酸雙肼屈（標準品）1,二酚

鹽酸阿米替林（標準品）2,5-二甲基吡

硝酸(標準品)

異托溴銨（標準品）N-甲酰

異安替比林（標準品）羥基-甲基-2-戊酮

賴氨匹林（標準品）N-芐氧羰基-L-精氨酸

愈創(chuàng)甘油（標準品）異戊

鹽酸哌丁（標準品）酰酮

甘露（標準品）丁二酰亞

甘露（標準品）3,5-二氟酮

依克立達酸酐

鹽酸文拉法辛（標準品）三聚

鹽酸文拉法辛丁

原卟啉IX四氫吡咯

甲磺酸羅哌卡因（標準品）2,6-二氟-羥基

甲磺酸羅哌卡因N-Boc-哌啶甲

扎銨（標準品）酸丁酯
嗜血桿菌通用探針法熒光PCR檢測試劑盒軟骨蛋白聚糖抗體FLAG Tag (NT)/FITC  熒光素標記抗標簽FLAG Tag標簽抗體（N端）IgG100 ul

去整合素樣金屬蛋白酶10抗體K3/FITC  熒光素標記抗K3蛋白抗體IgG20 ul

含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族9抗體FLAG Tag (CT)/FITC  熒光素標記FLAG Tag標簽抗體（C端）IgG100 ul

含錨蛋白重復序列-細胞因子信號抑制物盒蛋白家族8抗體FLAG Tag (CT)/HRP  辣根過氧化物酶標記 FLAG Tag標簽抗體（C端）IgG20 ul

植物生長激素ABP1抗體FLAG Tag(CT)/FITC  熒光素標記FLAG Tag標簽抗體（C端）IgG100 ul

肌動蛋白相關(guān)蛋白1抗體FLAG Tag(CT)/HRP  辣根過氧化物酶標記FLAG Tag標簽抗體（C端）IgG100 ul

α紅細胞分化相關(guān)因子抗體Dynamin 2/FITC  熒光素標記兔抗鳥苷三酸酶－發(fā)動蛋白2抗體IgG100 ul

血管緊張素激活蛋白1抗體Nadrin/FITC  熒光素標記Nadrin抗體IgG20 ul

Alpha清蛋白抗體E.coli O6 (Escherichia coli O6)/Biotin  生物素化兔抗大腸埃希桿菌O6抗體IgG100 ul