PCR技術的定量原理：
擴增曲線
在Real- qPCR中，對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應的進行，監測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應過程中產生的DNA拷貝數是呈指數形式增加的，隨著反應循環數的增加，終PCR反應不再以指數形式生成模板，從而進入“平臺期”。在該時期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR的終產物量與起始模板量之間無線性關系，所以根據終的PCR產物量不能計算出初始模板量。
熒光染料的優點：
產品僅用于科研使用簡便；
可以與任何PCR產物結合；
價格便宜；
熒光染料的缺點：
不能區分不同的雙鏈DNA
引物二聚體會影響檢測的敏感性
非特異性產物會影響結果的敏感性
引物二聚體和非特異性擴增問題可以通過熔解曲線 (Melting curve) 進行識別，進而通過PCR引物的設計和反應條件的優化得以解決。總的來說，SYBR Green I方法是一種基礎也的Real-time qPCR實驗手段。 產品名稱 | 阿古尼嗜血桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒 | 英文名稱 | Haemophilus agni | 貨號 | YSP96771 |
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熒光探針：
Real-e qPCR中的熒光探針為TaqMan探針，其基本原理是依據目的基因設計合成一個能夠與之特異性雜交的探針，該探針的5'端標記熒光基團，3'端標記淬滅基團。
正常情況下兩個基團的空間距離很近，熒光基因因淬滅而不能發出熒光。PCR擴增時，引物與該探針同時結合到模板上，探針的結合位置位于上下游引物之間。
當擴增延伸到探針結合的位置時，Taq酶利用5'外切酶活性，將探針5'端連接的熒光分子從探針上切割下來，從而使其發出熒光。檢測到的熒光分子數與PCR產物的數量成正比，因此，根據PCR反應體系中的熒光強度即可計算出初始DNA模板的數量。
TaqMan探針技術解決了熒光染料與非特異性擴增結合的問題，反應結束后無需通過熔解曲線檢測，縮短了實驗時間。
TaqMan探針技術的優點：
熒光背景低；
敏感性高；
雜交穩定性高；
熒光光譜分辨率好；
特異性高。
TaqMan探針技術的缺點：
成本高；
設計難度大；
只能用于檢測產物長度低于150bp的反應。
由于TaqMan探針的高特異性，可用于等位基因的辨別，特別適用于人類基因多態性以及根據SNP區別和定量菌株。
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熒光定量PCR原理：
產品僅用于科研熒光定量PCR早稱TaqMan PCR，后來也叫Real-Time PCR，是美國PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術。該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現其定量功能的。其原理：隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環，收集一個熒光強度信號，這樣我們就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光擴增曲線圖。
一般而言，熒光擴增曲線可以分成三個階段：熒光背景信號階段，熒光信號指數擴增階段和平臺期。在熒光背景信號階段，擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產物量的變化。而在平臺期，擴增產物已不再呈指數級的增加，PCR 的終產物量與起始模板量之間沒有線性關系，根據終的 PCR 產物量也不能計算出起始 DNA 拷貝數。只有在熒光信號指數擴增階段， PCR產物量的對數值與起始模板量之間存在線性關系，我們可以選擇在這個階段進行定量分析。為了定量和比較的方便，在實時熒光定量 PCR 技術中引入了兩個非常重要的概念：熒光閾值和 CT值。
特別提示：本公司的所有產品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途！
鹽酸安他唑啉（標準品）正庚
烏利司他2-溴-氟 鹽酸酚芐明（標準品）溴巴豆酸甲酯 鹽酸那林(標準品)二二單甲 貝諾酯（標準品）1-氨基辛烷 半糖（標準品）N,N-二甲基甘氨酸 醋酸甲萘氫醌（標準品）正辛 富馬酸馬斯汀（標準品）二二 富馬酸馬斯汀二正丁 富馬酸酮替芬（標準品）5-戊酸 己內酰（標準品）5-溴-1-戊 酸哌啉（標準品）二二二甲 米諾地爾（標準品）十一烷 尼爾雌（標準品）(S)-2-甲基-CBS-惡唑烷 7-羥基-甲基（標準品）壬酸 7-羥基-甲基環丁基 十一酸睪酮（標準品）1,烷磺內酯 雙嘧達莫（標準品）代吡啶
阿古尼嗜血桿菌探針法熒光PCR檢測試劑盒酸性酸酶樣蛋白2抗體Phospho-Dab1 (Tyr220) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Disabled 1抗體IgG20 ul AHNAK核蛋白2抗體Phospho-Dab1 (Tyr232) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Disabled 1抗體IgG100 ul 二酸腺苷核糖基化因子6相互作用蛋白抗體Phospho-Dab1 (Ser491) /FITC 熒光素標記兔抗、大、Disabled 1抗體IgG100 ul p53誘導蛋白5抗體Phospho-DBC1 (Thr454) /FITC 熒光素標記兔抗、大、膀胱癌缺失基因1IgG100 ul 錨蛋白重復域5抗體DAP-5/p97 /FITC 熒光素標記死亡相關蛋白5抗體IgG100 ul 腦鈉通道蛋白2抗體DBC1/FITC 熒光素標記兔抗、大、膀胱癌缺失基因1抗體IgG100 ul 腦鈉通道蛋白4抗體DAPK1/FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白激酶1抗體IgG100 ul 小腸鈉通道蛋白5抗體DAPK2/FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白激酶2抗體IgG100 ul APXL蛋白抗體DAPK3/FITC 熒光素標記凋亡相關蛋白激酶3抗體IgG100 ul |
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